野生金線蓮為多年生全草,南云南省屏邊縣科委提供。實(shí)驗(yàn)用金線蓮組培苗高8~10cm進(jìn)行無性快速繁殖培養(yǎng)。外植體為野生金線蓮(臺(tái)灣),培養(yǎng)基為Ms附加NAA(a—萘乙酸)、IBA(吲哚丁酸)、ZT(玉米素),經(jīng)誘導(dǎo)形成的組培苗再進(jìn)行無激素繼代培養(yǎng),每月繼代一次。培養(yǎng)條件為溫度(25±1)℃,光照強(qiáng)度:l 500LK,每天光照12H。所有實(shí)驗(yàn)材料的憑證標(biāo)本均存放在上海市中藥研究所。
二、野生金線蓮與組培金線蓮有效成分比較的研究結(jié)果:
金線蓮組培苗與野生藥材多糖比較通過對野生金線蓮(臺(tái)灣、云南、廣西)與金線蓮組培苗有效成分多糖進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)組培苗植株多糖量與野生植株(臺(tái)灣)多糖量接近,分別為18. 68%.19.18%,野生況:(廣西)較低,僅6.70%。
金線蓮組培苗與野生藥材氛基酸比較野生金線蓮(臺(tái)灣、廣西)與金線蓮組培苗的氨基酸測試比較顯示,從組成成分來看,金線蓮組培苗與其他不同來源金線蓮野生藥材中18種氨基酸及它們的量相近,其中以門冬氨基酸量最高,金線蓮組培苗,臺(tái)灣金線蓮,廣西金線蓮的總氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為9.17%,6.25%,6.30%.
金線蓮組培苗與野生藥材黃酮比較通過對金線蓮組培苗與野生金線蓮(臺(tái)灣、云南、廣西)有效成分總黃酮進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)組培苗植株總黃酮量與野生植株總黃酮量接近.金線蓮組培苗與原藥材R APD分析采用CTAB法,提取了組培金線蓮與野生金線蓮的總基因組,從35個(gè)10 tiler隨機(jī)引物中,篩選出8個(gè)有效引物,共檢出85個(gè)不同的多態(tài)性條帶,獲得了清晰穩(wěn)定重現(xiàn)性好的基因組DNA多態(tài)性指紋圖譜,每個(gè)引物產(chǎn)生的標(biāo)記數(shù)在5一19之間,具有良好的種內(nèi)特異性。
DNA多態(tài)性分析對35個(gè)隨機(jī)引物進(jìn)行篩選,選擇出8個(gè)擴(kuò)增效果、重復(fù)性均較好的引物進(jìn)行拍照.從擴(kuò)增的結(jié)果來看,不同的產(chǎn)地之間存在著明顯的多態(tài)性,初步證明運(yùn)用RAPD方法可以區(qū)分不同產(chǎn)地的金線蓮。以引物5420 (5'-:CCACACATC-3')的擴(kuò)增結(jié)果為例,其擴(kuò)增結(jié)果如圖1所示。圖1上顯示金線蓮組培苗的擴(kuò)增多態(tài)性條帶與野生金線蓮(臺(tái)灣)基本一致,由此可判斷組培金線蓮來源于野生金線蓮(臺(tái)灣),應(yīng)為同一物種。
研究結(jié)果還表明,通過組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)的金線蓮,也具有較高的藥用價(jià)值,不像人們認(rèn)為的野生金線蓮的有效成分遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于人工培養(yǎng)金線蓮的觀點(diǎn),甚至人工培養(yǎng)的金線蓮在某些有效成分方面還具有一定的優(yōu)越性。在目前金線蓮藥源緊缺的情況下,采用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行人工培養(yǎng)金線蓮具有較好的應(yīng)用前景。