組織培養(yǎng)已成為當前農(nóng)林種苗生產(chǎn)中的一種重要的繁殖手段,與常規(guī)的無性繁殖方法相比,它具有繁殖速度快、周年生產(chǎn)、產(chǎn)品一致性好等優(yōu)點,尤其在繁殖一些種源稀缺的品種時,更能體現(xiàn)它的優(yōu)勢。紅葉石楠是近年從國外引進的一個國際新品種,組織培養(yǎng)可以分以下幾個步驟進行:外植體的取得→初代培養(yǎng)(無菌系的建立)→繼代培養(yǎng)(增殖培養(yǎng))→生根培養(yǎng)→煉苗及過渡移栽→移植到大田。
外植體的取得
選擇紅葉石楠的莖尖和莖段作為組培用的外植體。在取得紅葉石楠母株后,先置于溫室內(nèi)培養(yǎng)2周左右,期間注意不灑葉面水,每隔3-5天噴施一次殺菌劑,可有效降低初代培養(yǎng)時的污染率。在實際操作中,選取嫩枝先端未木質(zhì)化和半木質(zhì)化部分,剪成長10cm左右的單芽,莖段部分去葉留2mm左右葉柄,莖尖部分可保留半張小葉,以飽和洗衣粉溶液浸泡3分鐘,用清水沖洗后備用。
初代培養(yǎng)
清洗后的外植體在接種前需進行消毒處理,在超凈工作臺上用75%酒精浸泡10秒鐘,再轉(zhuǎn)入0.15%升汞溶液中滅菌8分鐘,倒去滅菌液,用事先準備好的無菌水沖洗4-5次,瀝干水后,即可將帶腋芽的莖段或莖尖以生態(tài)學(xué)下端朝下,垂直接種到初代培養(yǎng)基上,以每瓶培養(yǎng)基接種一個外植體為宜。經(jīng)過多次試驗,初代培養(yǎng)基以1/2MS+蔗糖30g+瓊脂7g+2.0BA+0.2IBA為最佳,pH值5.5-5.8,培養(yǎng)室溫度控制在25℃-30℃之間,光照12小時。接種后一周左右腋芽開始萌動,30-40天可伸長到2cm左右,即可切下進入下一階段的繼代(增殖)培養(yǎng)。
繼代培養(yǎng)(增殖培養(yǎng))
一般第一次繼代時增殖率較低,經(jīng)2-3次繼代后增殖數(shù)可達5倍左右。繼代培養(yǎng)基可用MS+1.0BA+0.1IBA,pH值5.5-5.8之間,每日光照12小時。無根的試管苗經(jīng)30-40天培養(yǎng)達到3cm左右時,即可切割以擴大繁殖。當繼代苗達到一定數(shù)量后,可以進行生根培養(yǎng)。
生根培養(yǎng)
當紅葉石楠無根苗長到高2cm左右時,可轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基可用1/2MS+0.2-0.3NAA,一般經(jīng)一周左右可見紅色根生成,30-40天后根長1-3cm,即可進行煉苗反馴化,準備移栽。
煉苗及過渡移栽
紅葉石楠組培苗移栽可省略瓶內(nèi)煉苗過程,如能在溫室中擰松瓶蓋放置3-5天煉苗則更好,但要注意溫度應(yīng)控制在20℃-30℃之間。過渡移栽是整個組培過程中最為關(guān)鍵的一步,如失敗,則前功盡棄。因此移栽前要準備充分,如能在早春和秋冬季移栽在溫床上效果最佳。在實際操作中,應(yīng)根據(jù)不同地區(qū)的氣候特點而有所區(qū)別。在江浙一帶,過渡苗床可建在普通單體塑料大棚內(nèi),床寬1.2m左右,床四周用磚砌高30cm,床底整平,有條件的可加鋪地?zé)峒訙鼐,上鋪15-25cm的移栽基質(zhì),基質(zhì)以蛭石∶珍珠巖∶泥炭=1∶1∶1為好。
組培苗是在無菌條件下繁育的,在移栽過程中對外界環(huán)境需要一個漸進的適應(yīng)過程,因此需要對過渡苗床進行較為嚴格的消毒處理。實踐中我們使用1000倍敵
克松溶液澆透整個苗床基質(zhì),再用0.15%高錳酸鉀溶液噴灑苗床表面及四周,24小時后即可移栽小苗。也可用800倍福爾馬林噴灑苗床表面,用塑料薄膜密封24小時 以上,再通風(fēng)12小時,即可使用。
幼苗從瓶內(nèi)取出后,用清水將根部的瓊脂等洗凈,同時應(yīng)注意盡量減少根部損傷。種入苗床后,澆灌時盡可能選擇清潔的水源,移栽當天噴施1/4-1/2MS營養(yǎng)液,并噴施800-1000倍甲基托布津或1000倍多菌靈藥液,以后每隔一周噴施一次,需連續(xù)噴施3-4次,移栽初期需特別注意保持苗床和空氣濕度,一般需全封閉管理一周左右,再半封閉一周左右,根據(jù)天氣情況在25天左右可逐步通風(fēng),除去覆蓋物。在春秋季節(jié)移栽時,需遮蔭三周左右,冬季遮蔭二周左右即可。同時應(yīng)注意控制苗床溫度在15℃-30℃之間才利于成活,如環(huán)境溫度超過35℃,則不宜移栽。一般過渡移栽50天后,小苗就可上盆移栽,春季就可移入大田。
大田移栽
大田移栽的時機應(yīng)根據(jù)小苗生長情況和天氣情況確定。一般小苗長至5cm以上移栽就可以保證95%以上成活率,如在10cm以上移栽則效果更好。大田移栽后期管理與其他方法繁殖的小苗一樣操作即可。
組織培養(yǎng),與大家多多交流。