在實驗中常用的培養(yǎng)基,可將其中的各種成分配成10倍、100倍的母液,放入冰箱中保存,用時可按比例稀釋。配制母液有2點好處:一是可減少每次配制稱量藥品的麻煩,二是減少極微量藥品在每次稱量時造成的誤差。母液可以配單一化合物母液,但一般都配成以下四種不同混合母液。應(yīng)注意以下幾個方面:A.藥品稱量應(yīng)準確,尤其微量元素化合物應(yīng)精確到0.0001克,大量元素可精確到0.01克。B.配制母液的濃度適當(dāng),一是長時間保存后易沉淀,二是濃度大,用量少,在配制培養(yǎng)基時易影響精確度。C.母液貯藏不宜過長,一般幾個月左右,要定期檢查,如出現(xiàn)渾濁、沉淀及霉菌等現(xiàn)象,就不能使用。D.母液應(yīng)放在2-4℃的冰箱中保存。
(1)大量元素混合母液:指濃度大于0.5mmol/L的元素,即含N、P、K、Ca、Mg、S等六種鹽類的 混合溶液,可配成10倍母液,用時每配1000ml取100ml母液,配時要注意以下幾點:a.各化合物必須充分溶解后才能混合。b.混合時注意先后順序,特別要將鈣離子與硫酸根離子,磷酸根離子錯開,以免產(chǎn)生硫酸鈣、磷酸鈣等不溶性化合物沉淀。c.混合時要慢,邊攪拌邊混合。
(2)微量元素混合母液:指小于0.5mmol/L的元素即含除Fe以外的B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等鹽類的混合溶液,因含量低,一般配成100倍甚至1000倍,用時每配1000ml取10ml或1ml。配時也要注意順次溶解后再混合,以免沉淀。
(3)鐵鹽母液:鐵鹽必須單獨配制,若同其他無機元素混合配成母液,易造成沉淀。配法是將5.57g FeSO4.7H2O水溶液緩慢加入到7.45gNa2-EDTA微沸水溶液中,并不斷攪拌,最后定容到1000ml,用時每配1000ml培養(yǎng)基取5ml。
(4)有機化合物母液:主要是維生素和氨基酸類物質(zhì),這些物質(zhì)不能配成混合母液,一定要分別配成單獨的母液,其濃度有每ml含0.1、1.0、10mg化合物,用時根據(jù)所需濃度適當(dāng)取用。
(5)植物激素:每種激素必須單獨配制成母液,濃度為每ml含0.1、0.5、1.0mg激素,激素濃度的表示方法有兩種,一種是ppm(或每升中mg數(shù)),另一種是mol.用時根據(jù)需要取用。由于多數(shù)激素難溶于水,它們的配法如下:
1) IAA IBA GA3先溶與少量95%酒精,再加水定容到一定濃度。
2) NAA可溶于熱水或少量95%的酒精中,再加水定溶到一定濃度。
3) 2,4-D不溶于水,可用1mol的NaOH溶解后,再加水定容至一定濃度。
4) KIN和BA先溶于少量1mol的HCl中,再加水定容。
5) 玉米素先溶于少量95%酒精中,再加水至一定濃度。
2.培養(yǎng)基的配置
(1)混合培養(yǎng)基中的各成分。先量取大量元素母液,再依次加入微量元素母液、鐵鹽母液、有機成分,然后加入植物激素及其他附加成分。
(2)溶化瓊脂。稱取應(yīng)加的瓊脂和蔗糖,將瓊脂浸泡到透明后,用蒸餾水加熱燒開熔化瓊脂,待瓊脂完全溶化后,把1加入,用pH試紙測pH值,并用0.1mol的NaOH或HCl調(diào)pH為5.6-5.8,最后加水定容至所需體積。
(3)分裝。將熬好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶中,分裝時注意不要把培養(yǎng)基倒在瓶口上,以防引起污染,然后用封口膜或瓶蓋封口。
(4)滅菌。由于培養(yǎng)基內(nèi)有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),極利細菌和真菌繁殖,造成污染,影響組培的成功,一般有高溫高壓消毒和過濾消毒兩種方法。⒈高溫高壓消毒:一般用消毒鍋消毒,注意消毒鍋不能裝的過滿,采用三次放氣滅菌法,即0.05Mpa下放三次氣,在0.1Mpa維持15-20分鐘。⒉過濾消毒:一些易受高溫破壞的培養(yǎng)基成分如IAA、IBA、ZT等,不宜用高溫高壓法消毒,可用過濾消毒,可過濾消毒后再加入已高溫高壓消毒的培養(yǎng)基中,過濾消毒應(yīng)在無菌室或超凈工件臺上進行,以避免污染培養(yǎng)基。
組培專用母液和培養(yǎng)基的配制,多多交流。