多肉植物是指植物營養(yǎng)器官的某一部分,具有發(fā)達(dá)的薄壁組織用以貯藏水分,在外形上顯得肥厚多汁的一類植物。常見的有仙人掌科的仙人掌、仙人球、曇 花、蟹爪蘭、金琥;番杏科的生石花、肉錐花;百合科的康平壽、玉露、臥牛;大戟科的虎刺梅、彩春鋒;景天科的石蓮花、長壽花、虹之玉;龍舌蘭科的金邊龍舌 蘭、虎尾蘭;菊科的翡翠珠等。
多肉植物耐干旱,凈化空氣,具有外觀小巧玲瓏,植株肥厚多汁,造型特異等特點(diǎn),是近年來逐漸流行的一類觀賞植物。組織培養(yǎng)技術(shù),對保存多肉植物優(yōu)良的種質(zhì)資源、繁殖名優(yōu)珍稀品種、快速繁殖出口需要和園林綠化需要的優(yōu)良品種。
1.外植體的選擇
取優(yōu)良母株新萌發(fā)的幼嫩側(cè)芽、幼嫩枝條;一些沒有側(cè)芽的珍稀名貴品種的母株則可等待植株開花期間取其較充實(shí)的花梗作為外植體。 夏季休眠期,多肉植物外植體在培養(yǎng)基中對激素常反應(yīng)遲鈍,生長靜止,不易培養(yǎng)成功。
2.消毒滅菌
2.1選擇合適的培養(yǎng)基的,配置好、調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)募に貪舛取?/span>
2.2制作好的培養(yǎng)基須立即放入高壓滅菌鍋滅菌,備用。
2.3外植體材料的消毒: 切取多肉植物幼嫩的側(cè)芽或花梗→肥皂水或洗潔精洗滌→在自來水下沖洗→超凈工作臺(tái)中用75%酒精浸泡數(shù)秒→ 0.1%升汞處理10~30min,→無菌水沖洗6遍,→消毒濾紙吸干水分
3.接種無菌條件下操作→手術(shù)刀切取所需的培養(yǎng)材料→無菌操作植入初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
4.培養(yǎng)
4.1側(cè)芽植入培養(yǎng)基后培養(yǎng)15~21d,腋間萌發(fā)出多個(gè)腋芽芽點(diǎn),至30~45d,由外植體長成一團(tuán)叢芽。
4.2花梗外植體不定芽的誘導(dǎo): 花梗植入誘導(dǎo)培養(yǎng)基,經(jīng)15~21d培養(yǎng),花梗節(jié)膨大,并萌發(fā)1~3個(gè)不定芽,長至1cm左右約需 45d。
4.3叢生芽的增殖擴(kuò)繁
側(cè)芽外植體叢生芽的增殖:切分進(jìn)行增殖培養(yǎng)→培養(yǎng)基培養(yǎng)周期4~6周,擴(kuò)繁倍數(shù)約3~5,長至滿瓶,并可繼續(xù)不斷增殖。在經(jīng)若干次繼代增殖培養(yǎng)后,所 建立的 各個(gè)多肉植物品種無性系無一例外都不再順利增殖叢生芽,而是出現(xiàn)新芽少,芽體短簇,植株僵硬,類似俗稱的石頭苗,有的芽或芽叢還出現(xiàn)玻璃化傾向,無法繼續(xù) 培養(yǎng)。這種現(xiàn)象說明增殖培養(yǎng)時(shí)添加的激素濃度已不再適宜,調(diào)節(jié)外源激素的絕對濃度及不同種類激素的相對配比,當(dāng)調(diào)整后,瓶苗很快就恢復(fù)到原來良好的增殖狀 態(tài),激素的調(diào)整規(guī)律基本是以高低濃度適度地交錯(cuò)進(jìn)行,只有這樣才能使增殖擴(kuò)繁順利進(jìn)行,既保持一定的增殖系數(shù),又避免產(chǎn)生僵苗、畸形苗、玻璃苗等。由花梗 外植體誘導(dǎo)建立的無性系的增殖:花梗誘導(dǎo)出節(jié)芽后,數(shù)量同樣相當(dāng)有限,需繼續(xù)切分增殖,芽的增殖狀況及激素調(diào)整規(guī)律,同側(cè)芽外植體誘導(dǎo)建立的繁殖體系基本 一致。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),一些葉片帶條紋俗稱“錦”的多肉植物其珍貴的線條特征可在花梗誘導(dǎo)建立的體系中保存下來,而取帶“錦”植株的側(cè)芽進(jìn)行誘導(dǎo)建立的無性系 則難于保持該性狀, 這可能和外植體組織所帶的遺傳信息有關(guān),有待進(jìn)一步研究。