細(xì)胞工程:應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法通過細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平上的操作,按照人的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品的科學(xué)技術(shù)。亞龍組培分為植物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞工程。
一、細(xì)胞全能性
1. 概念: 具有某生物全部遺傳信息的任一細(xì)胞,都具有發(fā)育成完整植株的潛能,即每個(gè)細(xì)胞都具有全能性的特點(diǎn)。 注: 植物的篩管細(xì)胞無細(xì)胞核不具備全能性,哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞也無細(xì)胞核不具備全能性。
2. 原理:細(xì)胞中含有本物種的全套基因
3. 分化: 生物在發(fā)育過程當(dāng)中會(huì)出現(xiàn)分化,因?yàn)樯锏幕蛟诩?xì)胞中選擇性表達(dá),得到各種蛋白質(zhì)。
4. 分化與全能性的關(guān)系 一般而言,分化程度越高全能性越低。如:受精卵>干細(xì)胞>體細(xì)胞,植物細(xì)胞>動(dòng)物細(xì)胞也存在特殊情況:配子細(xì)胞屬于高度分化細(xì)胞但其全能性僅次于受精卵
二、植物組織培養(yǎng)技術(shù)
1. 原理:利用植物細(xì)胞全能性
2. 概念:在無菌和人工控制條件下將離體的植物器官、組織、細(xì)胞,培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上,適宜條件下誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織、叢芽形成完整植株。
3. 流程:離體細(xì)胞(外植體)→愈傷組織→根芽分化(胚狀體)→小植株外植體形成愈傷組織需經(jīng)過脫分化,脫分化:已分化的細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后失去特有結(jié)構(gòu)和功能成為未分化細(xì)胞。 愈傷組織:脫分化形成的具有分生能力的薄壁細(xì)胞。 注:脫分化和再分化都需激素誘導(dǎo)脫分化培養(yǎng)基中生長素含量高于細(xì)胞分裂素,再分化培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素效用高于生長素。
4. 條件:進(jìn)行組織培養(yǎng)的細(xì)胞必需是離體細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)的過程需保證無菌環(huán)境 培養(yǎng)期間要有適宜的溫度及營養(yǎng)等其他條件
5. 實(shí)驗(yàn):胡蘿卜的組織培養(yǎng) 1)消毒滅菌(培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶等操作中需要用到的物品需高壓蒸汽滅菌或其他滅菌方法) 2)組織塊消毒(使用70%的酒精和20%的次氯酸鈉溶液)3)取材(選取胡蘿卜根的形成層部位進(jìn)行培養(yǎng))原因:形成層屬于分生組織,分裂能力強(qiáng)易成活 4)接種 5)誘導(dǎo)愈傷組織(避光,恒溫23-26℃)6)分化培養(yǎng)(照光)