一、杜鵑花組培的基本技術(shù)環(huán)節(jié)
杜鵑花組織培養(yǎng),通常使用的外植體為莖尖、莖節(jié)和花蕾等。因花蕾的分化較為困難,周期長;莖尖的取材受到一定限制,故國內(nèi)多采用莖節(jié)為初代培養(yǎng)的外植體。
殺菌處理時,殺菌能力較強(qiáng)的升汞(氯化汞)易造成外植體材料的褐變死亡,不宜使用。試驗表明,采用飽和的次氯酸鈣液上清液或5%的次氯酸鈉液作為滅菌劑,效果較好,處理時間為15至20分鐘。為加強(qiáng)滅菌效果,還可加入1%的克菌丹或0.1%的吐溫-20(山梨糖醇)配合使用。材料滅菌前的預(yù)處理,通常采用70%酒精浸泡,不超過30秒。此外,用中性洗滌劑進(jìn)行材料的預(yù)處理,亦可有效降低其滅菌后的污染率。外植材料滅菌流程為:洗衣粉液浸泡20分鐘?流水沖洗至清?70%酒精浸泡30秒?滅菌水沖洗1分鐘?5%次氯酸鈉浸泡15分鐘,滅菌水漂洗3次,每次1分鐘。如此,可將外植體污染率降低到15%以下。
杜鵑花組培所用培養(yǎng)基,為Andeson改良MS培養(yǎng)基:將MS培養(yǎng)基中的硝酸銨和硝酸鉀用量分別減至1/4,取消了碘化鉀成分,鐵鹽的用量增加一倍。因杜鵑花科植物原產(chǎn)于高山酸性土壤,培養(yǎng)基的pH值宜為5.0至5.4。培養(yǎng)室溫度25℃,光照強(qiáng)度3000勒克斯,光照時間12至14小時。
杜鵑花在誘芽培養(yǎng)中使用的激素較一般植物有異,需要活性較強(qiáng)的細(xì)胞激動素類物質(zhì),才能達(dá)到滿意的效果。試驗表明,使用ZT的誘芽效應(yīng)最為顯著;添加KT的處理幾乎無叢芽或側(cè)芽發(fā)生,僅是原莖尖的伸長;而選用6-BA處理,則導(dǎo)致培養(yǎng)材料的褐變加劇,效果反不如對照。此外,在其后的增殖培養(yǎng)中,杜鵑花對細(xì)胞激動素種類的要求,仍以添加ZT為好。
國外在杜鵑花的組培中多使用2ip作為外源細(xì)胞激動素,效果較ZT好。但從經(jīng)濟(jì)的角度考慮,仍推薦使用ZT。
二、杜鵑花的初代和繼代增殖培養(yǎng)
杜鵑花初代誘芽培養(yǎng),NAA濃度不得超過0.1mg/L,ZT用量的增大對誘芽效應(yīng)有明顯促進(jìn)作用。但提高ZT濃度時,NAA濃度不宜同步增加,ZT/NAA值較大為好。從經(jīng)濟(jì)培養(yǎng)的意義出發(fā),初代培養(yǎng)的激素配比以ZT5+NAA0.01(mg/L)為宜,培養(yǎng)1個月左右時,誘芽率即可達(dá)100%,誘芽系數(shù)6.5。
杜鵑花植物組織技術(shù),與大家多多交流。