百合的組織培養(yǎng)

第一節(jié)快速繁殖

一．外植體的選擇與消毒

（一） 外植體

百合鱗片、鱗莖盤(pán)、球莖、葉片和花器官（花蕾、花絲）、種子（胚）和根等，都可以用作外植體，分化出苗。外植體應(yīng)從健壯、無(wú)病毒的百合植株上采取，然后進(jìn)行消毒處理、培養(yǎng)時(shí)可切割成5-8mm左右的小塊或切斷。

（二） 外植體的消毒

優(yōu)選生長(zhǎng)健壯、開(kāi)花性狀好的種球作為外植體。在取材前，做好將準(zhǔn)備接種的鱗莖在4-5℃的低溫下處理6-8周。

鱗莖→洗衣粉常規(guī)清洗→剝?nèi)�鱗莖外皮及外部2-3層鱗片，切取少許頂部及基部→用70%酒精消毒30-60s→飽和漂白粉上清液或0.1%升汞滅菌10-20min→無(wú)菌水沖洗4-8次→切塊接種。

花器官培養(yǎng)時(shí)，常取未開(kāi)放的花蕾。

花蕾→用70%酒精消毒30-60s→0.1升汞滅菌15min→無(wú)菌水沖洗3-5次→切開(kāi)，用鑷子取出幼嫩花瓣，未成熟的子房、帶花絲的花藥等花器官→接種。

二．培養(yǎng)過(guò)程

（一） 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件

一般用MS標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基。蔗糖3%，按需要加各種激素。溫度20-25℃，光強(qiáng)800-1500lx，光照9-14h/d,培養(yǎng)基PH值5.6-5.8

（二） 誘導(dǎo)培養(yǎng)基

1.   無(wú)菌種子播種用1/2MS培養(yǎng)基不加任何激素即可

2.   鱗片培養(yǎng)鱗片切塊→接種于MS+BA0.1-1+NAA0.1-1.0→5d鱗片周?chē)�開(kāi)始膨大→10d切口處出現(xiàn)白色小鱗狀凸起→15d左右長(zhǎng)出綠葉及小鱗莖。

3.   在高NAA低BA培養(yǎng)基上可一次性形成植株，但幼苗根部有腫脹現(xiàn)像。相反高BA低NAA時(shí)形成大量小鱗莖凸起，從中分化出芽而無(wú)根。這樣的苗可以轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基上（MS+IAA1+BA0.2或用NAA代替IAA）

4.   花柱和珠芽接種于MS+IAA1+BA0.2培養(yǎng)基上，可以直接分化出芽。若接種與MS+BA0.5-1.0+NAA0.3-1.0培養(yǎng)基上，一般先出現(xiàn)愈傷組織，然后從愈傷組織再分化帶有小鱗莖的幼芽，在花器官中以花絲為材料，優(yōu)于花柱合子房。

5.   根根切成小段接種在MS+BA0.5-1.0培養(yǎng)基上，形成腫脹的粗跟，再將其切成小段，轉(zhuǎn)到MS+BA0.2的培養(yǎng)基便能分化出苗。經(jīng)過(guò)5-6個(gè)月后，能形成直徑17mm左右的鱗莖，經(jīng)移栽成活情況良好，一些品種移栽后1年多即開(kāi)出大而美麗的花朵。

6.   莖尖或莖段接種在MS+BA0.5-3+NAA0.1-2培養(yǎng)基→20d基部萌發(fā)6-10個(gè)側(cè)芽→30d后發(fā)育為長(zhǎng)度2-3min無(wú)根苗芽。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，BA與NAA有利于叢生芽誘導(dǎo)，其中以BA2+NAA0.1-0.2效果最好。

7.   胚培養(yǎng)在雜交育種中，為防止雜種胚與母本胚乳間不親和，有可能造成敗育的情況下，可采取胚培養(yǎng)，以克服不親和現(xiàn)象，有利于育種工作順利進(jìn)行。

8.   葉片接種在MS+BA2+NAA0.2培養(yǎng)基。

（三） 繼代培養(yǎng)

將從各種外植體上誘導(dǎo)的小鱗莖，轉(zhuǎn)接到MS+BA1-2+NAA0.1-0.5培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)。在生長(zhǎng)素濃度一定的情況下，隨著B(niǎo)A濃度的增高，增值倍數(shù)趨于平緩，而且小鱗莖細(xì)小。所以，適當(dāng)降低BA的濃度有利于小鱗莖的繼代培養(yǎng)。

（四） 生根培養(yǎng)

將長(zhǎng)2-3cm的無(wú)根苗切下，除去愈傷組織，接種到MS+NAA0.3-0.5（或IBA0.1-0.5）或1/2MS+IBA0.5+0.5%AC上培養(yǎng)，一般半個(gè)月左右就可張根。

（五） 馴化移栽

試管小鱗莖形成后，先在室內(nèi)進(jìn)行5-7d的馴化培養(yǎng)，然后取出小鱗莖，清洗培養(yǎng)基。將小鱗莖移栽至疏松的基質(zhì)（可用園土：腐殖土：鋸末=1:1:1，或蛭石，珍珠巖））上，加強(qiáng)水肥管理。保持相對(duì)濕度75%，自然光50%。當(dāng)有3-4片真葉長(zhǎng)出時(shí)，可以定值，一般一個(gè)月內(nèi)正常出芽，一年內(nèi)能長(zhǎng)長(zhǎng)開(kāi)花。若將小鱗莖埋藏于濕沙并冷藏，則小鱗莖進(jìn)入休眠狀態(tài)，能儲(chǔ)藏較長(zhǎng)時(shí)間。

百合的組織培養(yǎng)，一點(diǎn)見(jiàn)解，望見(jiàn)笑。