污染是指在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基或培養(yǎng)材料上滋生細(xì)菌、真菌等微生物，使培養(yǎng)材料不能正常生長導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。

1.1 造成污染的因素

（1）培養(yǎng)基及各種使用器具消毒不徹底

（2）外植體滅菌不徹底，有菌殘存在細(xì)胞組織中

（3）操作時人為因素帶入

（4）環(huán)境不清潔

（5）超凈工作區(qū)域污染

1.2污染來源

（1）真菌：

室內(nèi)真菌種類主要有芽枝孢霉屬、曲霉屬、鉸鏈孢霉屬、鐮刀霉屬、青霉屬等。春、夏季，尤其是南方的梅雨時節(jié)，溫暖潮濕，非常適合真菌生長。如果長期使用空調(diào)而不注意通風(fēng)，可引起室內(nèi)真菌污染。室內(nèi)有空調(diào)比沒有空調(diào)情況下曲霉菌落數(shù)多4倍。

（2）細(xì)菌

細(xì)菌是無孔不入的微生物，為避免細(xì)菌的侵襲，科學(xué)家曾嘗試用抗微生物材料生產(chǎn)各種用品，但效果不十分理想，因為這些材料雖然能殺死細(xì)菌，卻充滿了化學(xué)物質(zhì)。

（3）組織培養(yǎng)過程中的污染源

屋內(nèi)潮濕，菌類繁衍較多、物品帶菌多、屋內(nèi)不干凈、屋內(nèi)有帶菌組培苗、接種方法不正確。

1.3 污染傳播途徑

（1）戶外風(fēng)傳播

菌類細(xì)小如塵，隨風(fēng)飄散，由上下落，見濕就長。

（2）渦流傳播

超凈工作臺上，擺放物品太多，當(dāng)無菌風(fēng)吹過時，就會在物品周圍形成渦

流群，菌類就會在渦流群中停留，從而降低凈化效果，增加污染機會。

（3）接種傳播

臟手每只帶有細(xì)菌4萬-40萬，干凈的手，指甲蓋大小也有3200多個細(xì)菌。指甲縫可以窩藏30多種細(xì)菌。如果手上帶菌較多，在操作過程中，就難免有菌落入培養(yǎng)基或植物材料上，而導(dǎo)致污染。另外，不正確操作也會增加污染機率，掀蓋生硬，滅菌不夠，操作過慢等。接種過程應(yīng)該輕開蓋，火滅慢，操作快。

1.4 預(yù)防污染的措施

（1）組培過程中使用的培養(yǎng)基以及接種過程中使用所有器具必須采用適當(dāng)方法嚴(yán)格滅菌。

（2）按照要求選擇外植體，采取措施盡量減少外植體上的帶菌量，以利于材料滅菌。如對枝條進行預(yù)培養(yǎng)，以其新抽枝作為外植體可大大降低污染。

（3）要注意保持接種和培養(yǎng)環(huán)境的清潔，定期進行熏蒸或噴霧消毒。保持

室內(nèi)空氣流通可以減少室內(nèi)真菌數(shù)量；保持室內(nèi)空氣干燥，如使用空調(diào)“除濕”

功能，也可減少真菌生長繁殖。

（4）進行無菌操作時要嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)程進行，避免人為因素造成污染。

（5）污染物品和污染培養(yǎng)基必須經(jīng)高壓滅菌，徹底殺死各種微生物后再進行清洗。

1.5 污染原因判斷及污染苗搶救

（1）若污染菌類是零星分散在培養(yǎng)基中，則可確定是人為引起的污染，比如培養(yǎng)基滅菌不徹底；超凈工作臺長時間不換濾網(wǎng)，致使凈化能力降低；接種用具滅菌不徹底；操作不正確，動作生硬緩慢，開瓶時間太久，接種臺擺放物品雜亂，操作中心在人體范圍之內(nèi)；接種室長期不滅菌，菌類太多。

（2）若污染菌類是從材料周圍長起，則可證明是植物材料帶菌引起�？赡苁墙臃N用具滅菌不徹底，接種時材料被污染；或者是未及時發(fā)現(xiàn)污染苗，接種過程交叉感染；

（3）若是外植體，菌類從材料培養(yǎng)基以上部分長起，而不是從培養(yǎng)基先長

起，且發(fā)生在5天以后，則說明是材料帶的內(nèi)生菌。若從培養(yǎng)基以下開始長菌，發(fā)生時間較早，且有從里向外的趨勢，則說明是切口引起的污染；

搶救措施：

（1）真菌污染后，如果已形成孢子，則必須經(jīng)高壓滅菌后扔掉，即使僅形成菌絲，菌絲能夠達(dá)到材料內(nèi)部，因此，真菌污染是滅絕性的。但若是細(xì)菌污染，由于細(xì)菌繁殖是靠芽孢，細(xì)菌不會彌散整個空間，因此只要及時發(fā)現(xiàn)，將材料上部未感菌的部分剪下轉(zhuǎn)接，材料仍可以用。

（2）用抗生素等殺菌藥劑的處理，雖有不少報道，但至今還未發(fā)現(xiàn)那種抗生素能夠?qū)Ω鞣N菌都有效，并且常常也會影響植物材料的正常生長分化。另一些藥劑，雖殺菌效果好，但往往容易引起鹽害，也無法利用。

組培常見問題之污染及其預(yù)防措施，謝謝閱讀。