在馬鈴薯栽培過程中，植株的逐年變小,葉片皺縮卷曲，葉色濃淡不均，莖塊變形龜裂，產(chǎn)量逐年下降等現(xiàn)象。就表明馬鈴薯已經(jīng)發(fā)生“退化”,種薯“退化”是其產(chǎn)量降低和商品形狀變差的主要原因。科學(xué)家經(jīng)過對馬鈴薯“退化”深入的研究，最終明確了病毒的侵染及其在薯塊內(nèi)積累是馬鈴薯“退化”的主要原因。目前應(yīng)用最廣泛而且在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和商業(yè)生產(chǎn)中取得巨大成功的植物脫毒技術(shù)，是生物技術(shù)中的植物莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)，也就是馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)中常說的“莖尖脫毒”，此項(xiàng)技術(shù)是根據(jù)植物細(xì)胞全能性學(xué)說、病毒在植株體內(nèi)分布不均勻及莖尖分生組織帶毒少的原理，結(jié)合使用鈍化病毒的熱處理方法，通過剝?nèi)∏o尖分生組織進(jìn)行培養(yǎng)獲得脫毒植株，從而獲得脫毒馬鈴薯�，F(xiàn)將馬鈴薯莖尖組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)介紹一下，僅供參考。

1.馬鈴薯莖尖組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)

1.1選擇優(yōu)質(zhì)健康的材料

田間選擇要注意這樣幾方面的事項(xiàng):所選的植株必須是表現(xiàn)典型的本品種特性的植株，符合準(zhǔn)備脫毒品種的特征包括株型、葉形、花色等植物學(xué)性狀及成熟期等農(nóng)藝性狀；植株生長健壯,無明顯的病毒性、真菌性、細(xì)菌性病害癥狀;單株產(chǎn)量和大薯率高，適時早收，選擇符合品種特性,無病斑、蟲蛀和機(jī)械創(chuàng)傷的大薯塊。

1.2 選擇培養(yǎng)基

一般MS培養(yǎng)基適用于大多數(shù)雙子葉植物,B5和N6適合大多數(shù)單子葉植物,馬鈴薯莖尖培養(yǎng)基以MS+GA30.05mg/l+6-BA0.5-0.1mg/l+NAA0.1-0.2mg/l+2%蔗糖+0.9%瓊脂效果比較好。

1.3 剝離和接種

將薯塊經(jīng)渡過休眠后進(jìn)行室內(nèi)催芽,待芽長至1～2cm還未展葉時,將芽剪下,然后將其放入燒杯,用紗布封口,在自來水下沖洗半個小時,取出放到操作臺上進(jìn)行消毒。消毒方法是將芽在75%的酒精中過一遍(約2秒),然后用次氯酸鈉溶液稀釋為2%～3%,浸泡2分鐘,然后用無菌水清洗3～5次。將消毒過的芽放在墊有吸水紙的培養(yǎng)皿上,每次消毒的芽不要太多,以防放置時間過長,莖尖褐變(消毒過程中所用器具均已事先高溫滅菌)。在操作臺使用前先打開紫外線消毒30分鐘,過后關(guān)閉紫外線燈,打開風(fēng)機(jī)。實(shí)驗(yàn)前換專用服裝,雙手用75%酒精消毒過的擦臺布擦拭,取消毒處理過的芽,以無菌鑷子固定,在30～40倍解剖鏡下進(jìn)行莖尖分生組織剝離。用解剖針小心地除去莖尖周圍的葉片組織,暴露出頂端圓滑的生長點(diǎn),用解剖針切取0.1～0.3mm,帶有1～2個葉原基。莖尖剝離時為防止解剖鏡近距離燈光烤傷莖尖分生組織,解剖鏡光源要用冷光源照明。切取的莖尖分生組織隨即接種到馬鈴薯莖尖培養(yǎng)基上,切面接觸瓊,置于培養(yǎng)室進(jìn)行離體培養(yǎng)。

1.4培養(yǎng)條件

將已接種外植體的試管置溫度23～25,光照3000lx,在光周期13～16h/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)2～4周成苗。

2.莖尖培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)

2.1剝?nèi)∵m當(dāng)大小的莖尖

通常培養(yǎng)莖尖越小,產(chǎn)生幼苗的無毒率越高,而成活率越低。不同病毒種類取出的難易程度不同。因此需針對不同的病毒種類,培養(yǎng)適當(dāng)大小的莖尖。如剝離培養(yǎng)一個葉原基的生長點(diǎn)產(chǎn)生的馬鈴薯植株,可去除全部馬鈴薯卷葉病毒,去除80%Y病毒和A病毒,去除0.2%X病毒。馬鈴薯病毒去除難易順序是:馬鈴薯紡錘塊莖病毒>馬鈴薯S病毒>馬鈴薯X病毒>馬鈴薯M病毒>奧古巴病毒>馬鈴薯Y病毒>馬鈴薯A病毒>馬鈴薯卷葉病毒。對于同一種病毒,剝離莖尖越小,脫毒率越高。

2.2莖尖接種后的生長及調(diào)節(jié)方法。

莖尖接種后的生長情況主要有4種：

1）生長正常,生長點(diǎn)伸長,基本無愈傷組織形成,1～3周形成小芽,4～周長成小植株。

2)生長停止,接種物不擴(kuò)大,漸變褐,至枯死。此情況多因剝離操作過程中莖尖受傷。

3)生長緩慢,接種物擴(kuò)大緩,漸變綠,成一綠點(diǎn)。說明培養(yǎng)條件不適,要迅速轉(zhuǎn)入高激素濃度的培養(yǎng)基,并適當(dāng)提高溫度。

4)生長過速,生長點(diǎn)不伸長或略伸長,大量疏散愈傷組織形成,必須轉(zhuǎn)入無激素培養(yǎng)基或采取降低培養(yǎng)溫度措施。